Intact Histone variants fractionation

몇개월전에 설치한 HPLC를 이용하여 histone Variants을 분리하고 있습니다.  아직 특별한 계획은 없지만 차후 특별한 histone variants를 분리해서 분석해야 할 일이 있을듯 합니다.

 

기존의 논문에서 처럼  C18컬럼으로 분리하면 Histone H1, H2, H3, H4 이 잘 분리가 되는것 같습니다.. 더 정밀하게 분리할려면 추가적인 최적화가 필요하겠지요. 아래는 대표적인 논문에 나온 크로마토그램입니다.

C18 column (4.6 × 250 mm, 5 μm, 300 Å pore size, 218TP54, Grace, Columbia, Maryland)  Proteomics. 2018 June ; 18(11):

Vydac C18 column (150 mm  1 mm, 5-um particle size). Molecular & Cellular Proteomics 5:541–552, 2006

아래는 직접 분리한 Calf histone 크로마토그램입니다. 표준 Histone과 비교해보면 논문에 나오는 경향대로 분리가 되는것 같습니다.