Formic acid(F.A) 와 trifluoroacetic acid (TFA)의 Trap-column에 대한 펩타이드 결합력 비교

 

 

LC에서 시료가 주입된후 제일 먼저 만나는 것이 바로 Trap-column입니다. (요즘은  trap-column없이 바로 analytical column으로 시료를 주입하기도 합니다). 사람도 첫만남이 중요하듯이  펩타이들도 첫 대면하는 trap-column에서 최대한 손실이 없이 결합되는것이 중요합니다. 

 

좋은 trap-column을 사용하면 제일 좋겠지요. 하지만 간단한 방법으로도 펩타이드가 trap-column에 결합되는 효율을 약간 높일수 있습니다.  대부분 알고 있는 사실이지만   강한 산성 조건에서 펩타이들은 C18에 더 잘 결합됩니다.  보통 Formic acid (FA)나 Trifluoroacetic acid (TFA)를 사용합니다. 그래서 시료를 0.1% F.A. 혹은 0.1% TFA에 녹여서 주입합니다. 만약 0.1% F.A.만 사용하고 있다면 0.1% TFA로 바꾸면 조금 더 좋을 결과가 나올  수 있을 것입니다.

 

아래는 0.1 % F.A와 0.1% TFA에 각각 녹인 BSA를 분석한후 얻어진 결과입니다. 크로마토그램상으로는 특별한 차이를 발견하지 못했습니다.

 

하지만  검출된 펩타이드의 수는 0.1% TFA에 약간 더 높습니다. 결국 Sequence Coverage도 당연히 살짝 더 높았습니다.  

 

0.1% TFA 조건에서만 검출된 펩타이드들 리스트입니다.  펩타이드의 조합으로는 특별히 무엇인가를 찾을수 있을지는 모르겠습니다.

물론  아주 좋은 trap-column을 사용거나 시료의 종류에 따라 TFA의 효과가 미비할수 있습니다. 하지만 trap-column을 오래사용하고 있어서 효율이 떨어져가고 있는 경우에는 TFA가 조금더 도움이 될 것같습니다. 단 시료를 강한 산성인 TFA에 장시간 두면 좋지 않기 때문에 분석전에 바로 녹여서 사용하는것이 좋습니다. 

 

 

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