110 cm µPAC Neo Column

저번의 Low Load µPAC  Neo Column을 테스트한후 이번에는 110 cm µPAC Neo Column 을 테스트해보았습니다.

현재 사용하는 있는 컬럼은 CoAnn Technology사의 pre-packed column입니다 (1.7 µm C18, 75 µ m x 20cm).

 

아주 만족하고 사용하고 있지만 분석방법을 더 향상 시킬수 있는 방법이 없나 생각중에 있습니다. 1.7 µm C18임으로 시스템에 압력이 상당히 많이 걸립니다. 그래서 컬럼이 길이를 더 길게 할수는 없습니다. 물론 가능하겠지만 장비에 큰 압력이 가해진 상태로 오랜 실험을 하는것이 좋은 생각은 아닌것 같습니다.  또한 1.7 µm C18이라서 지저분한 시료를 많이 주입하면 컬럼이 쉽게 막혀버립니다. 아주 많은 시료를 정량분석을 해야 할 경우에는 마음편히 실험할수 있는 시스템이 있으면 좋겠다고 생각합니다.

 

110 cm µPAC Neo Column은  길이는 길지만 압력이 훨씬 적게 걸립니다.  Post-column의 dead volume으로 피크의 모양이 좋지 않을수도 있으나 110 cm 길이가 이 부분을 보완해 줄 것 같습니다. 

 

길이가 긴 컬럼임으로 펩타이드가 용리되어 나오는 나오는 시간이 아주 깁니다.  아래는 최대한 최적화 시킨 130 min LC Gradient 조건입니다.  기존 컬럼에서 120min 를 사용한것을 130 min로 증가시켰습니다. 거의 앞쪽 15분까지는 펩타이드가 용리되지 않습니다. 예상대로 압력은 아주 낮습니다. 40C, 300nL에서 약 145 bar 정도입니다. 기존 컬럼으로는 약 10~15cm 길이에 해당하는 압력입니다.

 

 

 

 

아래는 200ng HeLa standard의 크로마토그램입니다.

 

Exploris480에서 200ngHeLa에 대한 DIA 결과입니다. 기존의 컬럼에 비해서 더 많은 단백질과 펩타이드가 검출이 되었습니다.

 

Spectronaut18로 분석후 얻은 Presuror Completeness 결과입니다.  110 cm µPAC Neo Column의 결과가 제일 좋습니다.

 

Precursor ion에 대한 CV값도 110 cm µPAC Neo Column에서 낮은 더 낮을 값을 보입니다.

 

 

 

동일한 컬럼에서 Exploris480과 Eclipe를 비교해보았습니다. 단백질의 수는 비슷하나  펩타이드의 수가 Eclipse에서 훨씬 높습니다

결론

기존의 컬럼을 이용한 120min DIA 분석을 110 cm µPAC Neo Column으로 교체할 예정입니다. 실험에 따라 단백질과 펩타이드의 수가 크게 증가하지 않을수도 있습니다. 하지만 110 cm µPAC Neo Column이 컬럼이 막히는 위험이 더 낮습니다.  많은 수의 시료를 분석할때 보다 더 재현성 있게 분석할수 있을 듯합니다. 장거리 여행에서는 아무래도 안전한 차량이 더 좋을것 같습니다.