Vanquish Neo 에서 컬럼규격 설정 및 관련 셋팅방법

Vanquish Neo 장비의 특징중 하나는 모든것이 통합적으로 연결되어 있는것입니다. 그 예로 시스템에 장착된 LC 컬럼의 규격을 입력을 해야 됩니다. 컬럼의 내경, 길이, 그리고 견딜수 있는 압력등을 입력합니다. 그러면 시료를 주입하는 과정에서 컬럼 Washing, Equilibrium 등에 소요되는 Volume을 자동적으로 계산되어 적절히 조절합니다.

 

 

아래는 컬럼의 규격을 설정하는 스크립트입니다.

 

EasySpray 컬럼, 내경 75um, 길이 15cm 컬럼에 대한 정보를 입력합니다. 이 컬럼은 약 1500 bar까지 견딜수 있습니다.

 

 

스크립트에서 작성이 끝나면 Xcalibur의 LC method에서 Update Column Information 을 클릭해서 업데이트 합니다.

업데이트가 안되는 경우 시스템 Configuration에 들어갔다가 다시 나오면 정상적으로 됩니다.

 

스크린에서 업데이트한 정보가 기존에 Method에서 설정된 컬럼정보와 일치하지 않으면 분석시작전에 아래와 같이 오류메세지가 나옵니다.

 

 

 

컬럼의 정보를 입력하는 이유는 시료를 Loading할때 그리고 분석이 끝난후 equilibrium 하는데 필요한 시간과 용매의 양을 결정하기 위해서입니다. 시료를 Loading 할때는 사용되는 설정값입니다.

 

컬럼의 압력, 유속, 혹은 두가지를 합쳐서 설정할수 있습니다. 유속만을 설정했을 경우 만약 컬럼이 막혀있을 경우 문제가 될수 있습니다. 설정한 유속까지 올리는 과정에서 고압이 생겨서 시스템에 문제를 일으킬수 있습니다. 압력으로 설정해 놓으면 일단 그 압력 이상으로는 올라가지 않습니다. 하지만 만약 컬럼이 막혔을 경우 설정한 압력에서 매우 낮은 유속으로 진행될수 있습니다. 그러면 상당히 많은 시간이 걸립니다. 두가지를 합쳐놓으면 둘중에 먼저 도달하는 시점에서 진행됩니다. 개인적으로는 그냥 압력만으로 설정합니다.   만약 trap-column을 장착하지 않고 분석컬럼만을 장착한 적절한 설정이 중요합니다. 그렇지 않으면 컬럼이 손상되거나 Loading 되는 시간이 매우 길수 있습니다. 설정한 컬럼정보와 일치하는 않는 값을 입력하면 경고메세니가 나옵니다.  EasySpray 컬럼의 경우 높은 압력에서도 견딜수 있으므로 높은 압력값을 설정할수 있습니다. 보다 빠르게 진행이 될수 있습니다.

 

이 장비는 분석이 끝난후 Equilibrium을 진행합니다. 다음 분석을 위해서는 컬럼안의 조건이 초기 조건이 되어야 합니다. 이러한 이유로 일반적인 장비의 LC gradient 에는 washing 후 equilibrium 과정을 포함시킵니다.  하지만  Washing 과정에서 모든 펩타이드가 다 용리되기 때문에 Equilibrium  과정에서는 펩타이드가 전혀  검출되지 않습니다.  질량분석에 있어서는 불필요한 시간입니다. 이러한 이유로 Vanquish Neo는 질량분석기의 검출이 LC gradient의 Washing이 끝나는것과 동시에 끝낼수 있습니다.  질량분석기의 검출이 끝나면 LC만 추가적으로 equilibrium이 진행됩니다. 이 경우 동일한 LC run time을 최대한 활용할수 있습니다.. 아래 그림과 같이 98% Buffer B에서 분석이 끝납니다. 하지만 다음 분석전에 LC만 Equilibrium을 진행하고 다음 분석을 준비합니다. 

 

 

아래 그림과 같이 질량분석은 끝났지만 LC 는 Equibrirum이 진행중에 있습니다.

 

 

컬럼정보입력은 이러한 Equilibrium의 시간과 양을 조절하는데 사용됩니다. Equilibrium Factor 는 보통 컬럼 Volume의 3배정도를 입력합니다. 2배를 해도 무난할듯합니다. 아마 C18 Materials이 없는 빈 컬럼으로 계산된 Volume이라 예상이 됩니다. C18 Materials이 충진되어 있으면 계산된 Volume에 비해서 더 적을것 같습니다. 실험실에서 충진한 컬럼으로 사용할 경우 heater 와 Viper tubing이 없는 경우가 많습니다. 즉 견딜수 있는 압력이 높지 않을것입니다. 이 경우 낮은 압력이 설정되어야 되며 이로 인해 Equilibrium 시간이 꽤 길게 됩니다.