HPLC 이동상 (buffers)의 오염으로 인한 background peaks

질량분석기의 감도는 정상이지만 크로마토그래피가 좋아 보이지 않을때가 있습니다. Background peak 가 상대적으로 지저분하거나 기존에 보이지 않던 피크들이 연속적으로 보이는 경우가 있습니다. 여러가지 이유로 인해서 background peak의 높이가 높으면 크로마토그램상에서 펩타이드 피크가 정상적으로 안보일때가 있습니다. 사용하고 있는 buffer가 오래되어 오염되는것도 주요 원인중 하나입니다.

 

아래 스펙트럼은 일반적으로 볼수 있는 background peak 들입니다. Polysiloxane에 해당하는 371.1012 와 445.1203 피크들이 보입니다. 이러한 피크들은 시료들의 피크에 비해서 상대적으로 높이가 낮기 때문에 큰 문제가 되지 않습니다.

 

 

아래 크로마토그램은 100fmol BSA를 분석한것입니다.  크로마토그램에서 TIC와 BPC 모두 정상적으로 보이지 않습니다. BSA 펩타이드에 해당하는 피크들이 보이지 않습니다.

 

Raw spectra를 자세히 보면 m/z 355.0701 피크가 background 에서 지속적으로 검출되는것을 확인하였습니다. 오른쪽 스펙트럼에서 보듯이 BSA 펩타이드가 존재하지만 이 m/z 355 피크의 높이가 훨씬 높습니다.

 

 

 

이로인해 모든 영역에서 가장 높이가 높은 m/z 355에 의해 TIC와 BPC 가 정상적으로 보이지 않습니다. m/z 355 피크가 인위적으로 제거된 크로마토그램을 만들기 위해서 Qualbrowser에서 range를 mz 400-1200으로 변경해보겠습니다.  아래와 같이 BPC 에서 기존에 보이지 않았던 BSA 피크들이 보여집니다.

 

 

TIC나 BPC가 정상적으로 보이지 않을  경우 질량분석기의 오염을 의심하기 전에 Buffer 오염 혹은 다른 원인으로 background peak 의 높이가 올라간것이 아닌지 확인해야 합니다. 정확한 원인을 알지 못한 상태에서 질량분석기 내부를 청소하는것은 그다지 즐거운 일은 아닙니다.