EasySpray 컬럼, 어떤 길이의 컬럼을 선택할까?

실제 실험에서 사용할 컬럼의 길이를 정하는 중입니다.  테스트용으로는 15cm 컬럼이 적당하지만 실제 DIA 나 TMT 분석 실험에 사용하기 위해서는 조금더 더 긴 컬럼이 필요합니다.  가능하면 긴 컬럼을 사용해서 더 좋은 결과를 얻고 싶은 마음이 있습니다. EasySray컬럼의 경우 50cm길이의 컬럼을 사용하더라도 heating이 되기때문에 아주 큰 압력은 걸리지 않습니다. 하지만 최종적으로 25cm 으로 사용하기로 하였습니다.압력도 적절하고 50cm 컬럼에 비해서 피크모양도 크게 차이가 나지 않습니다. 무엇보다 다양한 종류의 실험에 마음편하게 적절히 사용될수 있을것 같습니다.

 

 

 

 

 

 

아래는 Promega사의  Human extract  를 digestion 후 2ug을 주입한 2시간 길이의 크로마토그램입니다. 75 um x 2cm trap column이 연결되어 있습니다. 여러번 반복 실험에서 재현성 있게 나왔습니다. 피크들도 골고루 잘 퍼져있습니다. 

 

 

 

LC gradient는 아래와 같습니다.

 

 

 

특히  펩타이드들이 거의 118분까지 용리된후 그 다음부터는 더 이상나오지 않습니다. 전체 120분 시간이 아주 잘 활용된것 같습니다.

 

 

118앞쪽에  뭉쳐서 나오는 피크들은 아마 매우 hydrophobic한 펩타이드거나 polymer인듯합니다. 110에서 115분 사이에  Gradient를 60%로 올리는 과정에서 다 흘러나온듯합니다. 대부분의 charge state가 3 이상이고 m/z값도 아주 큽니다.  잘 모르겠지만 아마 길이가 아주 긴 펩타이드이가 아닐까 생각합니다.