반응형
- 앞글에서 Direct Injection의 유용성의 예를 보여드렸습니다. 하지만 Direct Injectino은 실험실에 따라 꺼려하는 경우도 있습니다. 감도를 높이는것보다 컬럼 손상이나 장비오염 문제에 더 신경을 써야 하기 때문입니다.
- 일반적으로 시료는 분석적에 C18 으로 정제를 합니다. 하지만 여전히 불순물이 남아 있을수 있습니다. 또한 컬럼에 손상을 주는 입자들이 남아 있을수도 있습니다. 이론적으로 생각한다면 컬럼에 손상을 줄수있는 입자들은 C18 컬럼정제과정에서 제거될수있습니다. C18 자체가 Filter 역활을 하기 때문입니다. 하지만 추가적으로 컬럼을 보호하고 싶다면 Online Inline Filter를 장착할수 있습니다. 상세한 정보는 아래와 같습니다.
Viper™ and nanoViper™ Fingertight Fittings Accessories (thermofisher.com)
- 최근에 Direct Injection Mode로 분석하기 위해서 구매하였습니다. 모양은 아래와 같습니다.
- 일단 EasySpray컬럼과 Viper tubing사이에 연결하였습니다. 따로 Tubing이 없기 때문에 dead volume이 없습니다. 시스템전체를 보호하기 위해서는 최대한 시료가 주입된 부분에 가까운곳에 연결하는것이 좋을것같습니다. Vanquish Neo의 경우 Autosampler valve중에 적당한 위치에 연결하면 될듯합니다. 하지만 Valve에 장착하다가 잘못하면 Valve자체를 교체해야 되기 때문에 조심스럽습니다.
- Inline Filter를 장착하지 않은것과 장착했을때 크로마토그램을 보면 거의 동일합니다.
- 검출된 단백질과 펩타이드의 수에도 거의 변화가 없고 오히려 약간 높습니다.
- 물론 Trap-column을 사용때도 사용해도 됩니다. 이때는 아마 Trap-column 앞쪽에 장착을 해야 될듯합니다. 불순물은 제거할수 없겠지만 컬럼을 막히게 할수있는 입자는 제거할 수 있을듯합니다.
'프로테오믹스(단백체학)' 카테고리의 다른 글
Direct injection mode 로 1ng HeLa로 2000개 단백질 검출하기 (0) | 2022.07.04 |
---|---|
ProteaseGuru: A Tool for Protease Selection in Bottom-Up Proteomics (0) | 2022.06.29 |
Vanquish Neo에서 Direct injection mode 로 검출수 높이기 (0) | 2022.06.29 |
단일 단백질 검출시 Dynamic Exclusion 기능 없이 분석하기 (0) | 2022.06.24 |
Orbitrap Eclipse에서 Turbo TMT 기능 (0) | 2022.06.23 |
댓글