Haptoglobin O-linked glycopeptides의 PRM 정량분석

앞에서 설명한 Haptoglobind에 존재하는 HexNAC이 한개 붙은 O-linked glycopeptide 에 대해 Targeted PRM Assay를 해보았습니다.

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0.5 ug HeLa 에 10, 50, 100, 200 ng Haptoglobin을 spiking 하였습니다.

두개의 펩타이드 form  (VVLHPNYQVDIGLIK 와  VVLHPNYS(HexNAC)QVDIGLIK)을 사용하였습니다. 

 

 

PRM을 통해 검출된 각 펩타이드의 product ion은 아래와 같습니다 (Green color). Fragmentation과정에서  HexNac이 떨어지게 됨으로 HexNAC이 붙어 있는 Fragment는 검출이 되지 않았습니다. 하지만 충분한 b, y-ion이 검출되었습니다. 

 

 

반복실험에 따른 Peak area값은 아래와 같습니다.  Spiking한 양에 따라 이론적인 값과 유사한 정량성을 확인하였습니다.

비로 glycopeptide이기는 하나 상대적으로 적은 glyan이 붙어 있는 경우는 이렇게 PRM을 통해서 정량분석이 가능함을 확인하였습니다.

 

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