Thermo Easy-Spray Source 와 column (50 cm, 25cm)을 이용한 펩타이드 분리

오래전에 Thermo 사의 Easy-Spray Source 와 Easy-Spray column을 구매하였으나 별로 사용하지 않았습니다. 실험실에서 충진해서 쓰는 컬럼으로도 분석서비스를 하는데는 큰 문제가 없습니다. 컬럼 한개가  $1,000불이 넘는걸 감안하며 몇불도 안되는 단가의 직접 충전한 컬럼이 여러모로 유용하다고 생각했습니다.  하지만 프로젝트에 따라 Easy-Spray Source 와 Easy-Spray column을  사용해야할 일이 있을듯합니다. 특별히 직접 컬럼을 만들고 사전에 테스트하는 번거로운 작업을 없앨수 있을것 같습니다. 나의 노동력 시간이 컬럼만드는데 사용하는 시간보다  더 가치있다고 생각이 들어야 될것 같습니다.

 

 

50 cm 와 25cm Easy-Spray Column 비교

50 cm 와 25 cm 길이를 각각 구매하였습니다. Easy Spray Source에 heater가 장착되어 있기 때문에 길이가 긴것에 비하면 압력은 상대적으로 높지 않습니다.  실제 서비스시료를 분석에 적용하기 전에 간단히 테스트를 해보았습니다.

 

아래는 50cm 길이의 컬럼에서의 BSA standard의 크로마토그램입니다.  일반적으로 사용하는 gradient 를 사용하였는데 펩타이드들이 아주 늦게 용리되었습니다. 아마 긴 컬럼의 길이로 인해  k' 값이 큰 것 같습니다. 피크의 모양은 아주 좋지만 Gradient를 최적화 하는것이 쉽지 않을 듯합니다. 

 

 

 

Easy-Spray Column, 50cm, 2.0 µm C18, 100fmol BSA

다음은 25cm 길이의 컬럼을 이용하여 5-45% 의 Gradient로 두번 분석하였습니다. 아래와 같이 50 cm보다는 좋은 크로마토그램을 얻었습니다. 두 번의 반복 주입에서 좋은 재현성을 얻었습니다. 

 

 

Easy-Spray Column, 25cm, 2 µm C18, 100fmol BSA, 30min

25 cm In-house packed Column

이번에는 25 cm 길이의 in-house packed column (2.4 µm C18)으로 분석하였습니다. Easy-Spray column에 비해서 피크 모양은 약간 넓지만 전체적으로 잘 분포된 크로마토그램을 볼수 있습니다.

 

 

In-house Packed column, 25cm, 2.4 µm C18, 100fmol BSA, 30min

 

아래는 대표적인 펩타이드인 HLVDEPQNLIK (m/z 653.3624) 에 대한 피크 모양을 비교해보았습니다. 예상대로 Easy-Spray column에서 좋은 분해능을 보였습니다. 하지만 실험실에서 충진한 컬럼에서도 좋은 분해능이 보여집니다. 

 

 

아래는 Easy-Spray Column에서 60 min gradient로 3번 반복주입한 크로마토그램입니다. 아주 높은 재현성을 보였습니다.

 

Easy-Spray Column, 25cm, 2 µm C18, 100fmol BSA, 60min

다음은 200ng HeLa standard digest로 3번 분석한 크로마토그램입니다. 전반적으로 높은 분해능으로 피크들이 넓게 잘 분포되어 잘 분리가 되었습니다. 재현성도 아주 높습니다.

 

결론은...."비싼것은 제 값을 한다" 입니다.

 

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