컬럼을 충진후 LC에 장착하여 실제 분석을 하기전에 몇가지 단계가 있습니다.
Gas 충진한 컬럼은 완전히 조밀하게 충진이 안될 경우가 많습니다. 그래서 일단 C18이 충진된 컬럼은 nano LC에 연결하여 추가적으로 압력을 가하여 완전히 충진을 시켜야 합니다. 그리고 원하는 길이로 절단하여 사용합니다. 이때 컬럼을 nano LC에 연결하기 위해서는일반적으로 sleeve와 metal nut와 ferrule이 필요합니다. 보통 여기에 capillary를 삽입하여 tight 하게 연결하고 난후 capillary를 제거하면 다시 사용이 불가능합니다.
그래서 컬럼 충진후 LC에서 추가 충진후 적당한 길이로 절단하여 다시 연결할때는 새로운 sleeve와 metal nut가 필요합니다. 가끔 이것은 아주 번거롭습니다.
Optimizetech사에서 UPLC LC에서도 capillary column을 여러번 연결할수 있는 adapter가 나왔습니다.
아래와 같이 충진한 컬럼을 연결합니다. 아주 긴 컬럼이지만 LC로 충진후 적당한 길이로 절단해야 합니다.
LC와 연결하여 약 600 bar에서 용매를 흘려주면서 컬럼을 충진시킵니다
충진후 적당한 길이로 절단한후 LC에 다시 장착합니다.
노란색깔의 Driver를 이용하여 손쉽게 손으로도 연결을 할 수 있습니다. 연결후에는 아래와 같이 제거하면 됩니다.
Tool 없이 손으로만 연결한후 압력을 확인해보니 600 bar에서 600 nl/min 정도가 됩니다. 2.4 um C18. 25cm 컬럼에 적당한 flow-rate이 나옵니다.
'프로테오믹스(단백체학)' 카테고리의 다른 글
Pharmafluidics 사의 µPACᵀᴹ 컬럼 사용후기 (1) | 2021.03.08 |
---|---|
Comparison of BSA HCD, ETD, and EThCD Spectrum (0) | 2021.03.07 |
SDS buffer가 들어간 펩타이드 분석 (실패경험) (0) | 2021.03.04 |
Data-dependent Acqusition에서 Gas-phase fractionation의 효율성 (0) | 2021.02.28 |
Thermo Easy-Spray Source 와 column (50 cm, 25cm)을 이용한 펩타이드 분리 (0) | 2021.02.26 |
댓글