이전의 uPAC컬럼은 개인적으로 테스트를 해본 결과 광고한것 만큼 좋은 결과를 얻지 못했습니다 이전글에도 자세한 내용이 있지만 컬럼이후의 연결선이 너무 많아서 설치에 불편함이 많았습니다. 그리고 잘 연결하지 못하면 void volume으로 인해 peak모양이 엄청 넒어지는 단점이 있었습니다.
Pharmafluidics 사의 µPACᵀᴹ 컬럼 사용후기 (tistory.com)
Pharmafluidics 사의 µPACᵀᴹ 컬럼 사용후기
최근 Pharmafluidics사에서 출시된 µPACᵀᴹ컬럼이 논문에서 종종 등장합니다. Nano column을 사용하는데 있어서 가장 큰 단점은 아마 쉽게 막히거나 Retention time의 재현성이 상대적으로 낮다는것입니다
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Thermo Fisher로 합병된후 이런 부분이 어느정도 해결이 되었지만 반신반의한 마음으로 구매를 했습니다.
가장 불편했던 Grounding 부분이 보완되어서 이제는 컬럼 body에 붙어 있습니다. 그래서 추가적인 연결선이 필요가 없습니다. Emitter의 경우도 EasySpray source에 장착될수 있도록 Emitter 판매됩니다. 하지만 컬럼의 특성상 컬럼이후의 tubing과 Emitter의 추가는 피할수 없을듯합니다.
컬럼은 대칭이라서 어느쪽으로 연결해도 상관이 없습니다. 양쪽 tubing의 길이가 다릅니다. 메뉴얼에서는 긴쪽을 컬럼 outlet로 사용할것을 추천합니다. Void volume을 줄이기 위해서 짧은쪽을 사용하고 싶지만 LC와 EasySpray source간의 거리가 길어 설치가가 쉽지 않습니다. 긴쪽을 사용하면 컬럼을 컬럼 heater에 장착할수 있습니다. 아래와 같이 설치를 하였습니다. 평균 압력이 300nL/min에서 150bar정도 됩니다.
이전의 경험으로는 Grounding으로 인해 컬럼에 전달하는 Voltage의 효율이 떨어졌습니다. Grounding이 없는 상태에 문문제가 없는 Spray가 Grounding을 연결하자 마다 바로 bubble이 생기는 현상이 있었습니다. 이것때문에 꽤 고생을 했었습니다. 이번에도 유사한 현상이 있었지만 약간 높은 Voltage값(2.1kV)으로 설정후에는 정상적인 Spray가 되었습니다.
현재는 CoAnn Technology사의 사용컬럼(75µm x 20cm, 1.7µm)을 사용하고 있습니다. 시스템의 압력이나 분리능을 고려해서 정한것입니디. 이 컬럼에 아주 만족하고 있습니다. 그래서 이 컬럼과 µPAC을 비교해보았습니다.
아래는 50ngHela standard를 60 min LC gradient로 분리한 크로마토그램입니다. CoAnn사의 컬럼이 분리능이 조금 더 좋지만 µPAC 컬럼도 상당히 분리능이 좋습니다. 컬럼이후 tubing이 있는걸 감안한다면 아주 괜찮은 피크모양입니다.
검출된 단백질 및 펩타이드 수입니다. CoAnn Technology사의 컬럼에서 조금더 많은 수가 검출이 되었습니다.
아래는 3µg Brain tissue 시료의 120min 크로마토그램입니다. 재현성이 아주 좋습니다.
아래는 µPAC 을 사용해서 3가지 서로 다른시료에 얻은 DIA 결과입니다. 기존의 컬럼의 숫자에 비해서 약간 적지만 그래도 충분한 수가 검출되었습니다. 기대를 많이 안해서 그런지 아주 만족합니다.
µPAC 컬럼의 피크는 Spray tip이 붙어 있는 일체형에 비해서 모양이 좋지 않습니다. 기존에 발표된 논문에서 사용한 raw file을 다운받아서 재확인도 해보았습니다. 하지만 낮은 압력에서도 실험이 가능하고 내구성이 좋기 때문에 장기간 사용시 혜택이 있지 않을까 생각합니다. 많은 시료를 분석할때 간혹 컬럼의 상태가 나빠지는 경우가 있습니다. 하지만 이 uPAC 컬럼의 경우 이러한 부분을 많이 감소시켜 줄수 있을듯합니다.
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